高选择性重组基因工程菌治理含汞废水的研究
利用构建的高选择型基因工程菌生物富集模拟电解废水中的汞离子。模拟电解废水中除含有3。0mg•L-1的汞离子外，还含有十种以上的其它金属离子，且pH值为9.0。实验表明，与重组菌对只含汞离子的水溶液的处理结果比较，电解废水中其它组份的存在意外地增大了重组菌富集汞离子的作用速率，但同时却使细菌的最大汞富集量降低了约30%。
1.4 实验方法
1.4.1 菌种保存 在500mL摇瓶中将重组菌接种到200mL含50mg·L-1氨苄霉素和30mg·L-1卡那霉素的LB培养基(Luria-Bertanimedium)中，在37℃下振荡培养至OD600约为4(振荡速率为170min-1)，在1.5mL无菌微型离心管中加入870μL细菌培液中和130μL88%的甘油，混合后用液氮速冷，然后保存在-80℃。
1.4.2 汞离子的生物富集 在1000mL摇瓶中装入300mLLB培养液，加入50mg·L-1氨苄霉素和30mg·L-1卡那霉素，然后接入1mL细菌-甘油培养液，在37℃下振荡(振荡速率为170min-1)培养至过夜。取少量菌液接种到相同的LB培养液中，使初始菌体密度为OD600值01~0.3，37℃下振荡培养至OD6000.5-0.7时添加诱导物异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)至终浓度为1.0mM。再次振荡培养4h，4℃下离心收获菌体待用。
菌体在使用前先用磷酸缓冲液洗涤，然后悬浮于含不同浓度汞离子的模拟电解废水中在37℃下振荡培养1h，离心收集菌体。为测量菌体内所富集的汞离子含量，将收集的菌体干燥后用70%的高纯度硝酸溶液消化过夜。考察富集速率时，在不同的时间用0.2μm孔径的醋酸纤维膜收集菌体，以使菌体和处理液尽快分离开来。
由于重金属离子易于被容器器壁吸附而导致实验误差，实验中所用的所有导管和玻璃容器使用前都用20%的硝酸溶液浸泡过夜，然后用去离子水浸洗干净。
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